RetroBeads™逆行熒光示蹤劑

產(chǎn)品描述：

Lumafluor公司 RetroBeads™ 是逆向示蹤領(lǐng)域的原裝微球，也是經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證高效可靠的微球產(chǎn)品。綠色和紅色熒光 RetroBeads™ 僅由 Lumafluor 供應(yīng)。穩(wěn)定、可靠的逆向示蹤，唯有Lumafluor RetroBeads™ 是您的優(yōu)選。

Lumafluor RetroBeads™ 核心優(yōu)勢(shì)：

1）高度精準(zhǔn)注射—特別適用于精細(xì)神經(jīng)連接研究

2）胞內(nèi)長(zhǎng)期穩(wěn)定存在（> 1年）且無(wú)毒副作用

3）兼容性強(qiáng)：可與多數(shù)順行示蹤劑、原位雜交及免疫組化技術(shù)聯(lián)用

操作流程：

【產(chǎn)品說(shuō)明】

1.包裝形式：蒸餾水懸浮濃縮液。

2.紅色微球：

1）可直接使用或稀釋。

2）大鼠視覺皮層實(shí)驗(yàn)顯示1:4稀釋不影響標(biāo)記效果。

3）初次實(shí)驗(yàn)建議使用原液。

4）可用蒸餾水或標(biāo)準(zhǔn)鹽溶液（NaCl/KCl）稀釋。

3.綠色微球

1）即用型制劑

2）禁止稀釋

【儲(chǔ)存條件】

1.冷藏保存于加濕容器中（防蒸發(fā)）

2.嚴(yán)禁冷凍（會(huì)導(dǎo)致持久性失效）

3.干燥后不可復(fù)溶

4.正確儲(chǔ)存條件下有效期可達(dá)數(shù)年

【注射方法】

1.推薦方式：

1）壓力注射（如1mL漢密爾頓注射器）

2）局部神經(jīng)環(huán)路：30-50納升（30-50μm玻璃微量注射器）

3）常規(guī)逆行示蹤：0.1-0.3微升（大口徑針頭）

2.擴(kuò)散特性：

1）注射點(diǎn)擴(kuò)散范圍<1mm

2）大范圍標(biāo)記需多點(diǎn)注射

3）不推薦電離子透入法（微珠帶凈負(fù)電荷）

【存活時(shí)間】

1.溫血脊椎動(dòng)物：

1）最短有效標(biāo)記時(shí)間：24小時(shí)

2）48小時(shí)內(nèi)標(biāo)記強(qiáng)度遞增，此后保持穩(wěn)定。

2.冷血?jiǎng)游?/span>：建議初始存活時(shí)間設(shè)為1周。

3.最長(zhǎng)存活期：未明確，但14個(gè)月后標(biāo)記仍穩(wěn)定，推測(cè)為持久性標(biāo)記。

4.無(wú)毒性：未發(fā)現(xiàn)對(duì)動(dòng)物或神經(jīng)元的毒性效應(yīng)。

【固定與處理】

1.標(biāo)準(zhǔn)固定流程：

1）0.1 M磷酸緩沖液沖洗

2）4%多聚甲醛（0.1 M磷酸緩沖液，pH 7.4）固定

2.避免戊二醛：會(huì)引發(fā)組織自發(fā)熒光，干擾標(biāo)記（綠色微球在戊二醛固定后不可見）。

3.切片處理：

1）冰凍切片收集于磷酸緩沖液，貼附于明膠包被載玻片，空氣干燥。

2）充分干燥后，二甲苯透明1分鐘，封片（推薦Fluoromount或Krystalon）。

4.注意事項(xiàng)：

1）短時(shí)間（<5分鐘）接觸酒精或二甲苯無(wú)害，但長(zhǎng)時(shí)間會(huì)破壞微球。

2）嚴(yán)禁甘油：微球?qū)Ω视兔舾校瑫?huì)快速褪色（可改用水楊酸甲酯）。

3）避光保存時(shí)，標(biāo)記可穩(wěn)定1年以上（但背景熒光可能增強(qiáng)）。

4）塑料包埋后無(wú)法保留標(biāo)記。

【觀察方法】

1.紅色微球：

染料為羅丹明，適用任何羅丹明熒光濾光片（部分舊款尼康濾光片背景較高，推薦蔡司或徠卡標(biāo)準(zhǔn)濾光片）。

2.綠色微球：

適用寬波段熒光素濾光片（窄波段信號(hào)較弱，Lucifer Yellow濾光片背景較高）。

3.抗光漂白：長(zhǎng)時(shí)間觀察或顯微攝影無(wú)明顯褪色。

4.鏡頭選擇：

1）低倍干鏡（如4×、10×）通常無(wú)法清晰觀察標(biāo)記。

2）推薦使用10×油鏡（NA ≥ 0.4）或更高倍鏡，25×油鏡可顯著提升綠色微球標(biāo)記的清晰度。

3）實(shí)驗(yàn)失敗判斷前，請(qǐng)用油鏡檢查注射位點(diǎn)附近切片（應(yīng)存在大量局部標(biāo)記細(xì)胞）。

綠色微球特別提示

1.年齡影響：

幼年動(dòng)物標(biāo)記轉(zhuǎn)運(yùn)效率更高，組織自發(fā)熒光更低，建議優(yōu)先選用。

2.降低自發(fā)熒光：

1）使用更薄切片（如30 μm而非40-50 μm）。

2）選用幼年動(dòng)物。

3）封片后盡快觀察（背景熒光隨時(shí)間增強(qiáng)）。

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